Vial Mondo de Cultivo Líquido

Vial Mondo de Cultivo Líquido 

Un vial de cultivo líquido es una solución en la que se inyectan las esporas de un Hongo Psilocybe. Esta solución hará que las esporas germinen más fácil y rápidamente. Esto significa que no tienes que esperar semanas, desde el momento en que esparciste el cultivo líquido sobre el sustrato, hasta que tus setas mágicas empiecen a salir (brotar) del sustrato. Un vial de esporas está muy concentrado y, por lo tanto, rápidamente se sobredosifica el sustrato. Con el Vial Mondo de Cultivo Líquido puedes debilitar la concentración para que puedas esparcir mejor las esporas por toda la superficie del sustrato y así optimizar la colonización. Es importante que después de inyectar las esporas en el vial de cultivo líquido, de vez en cuando agites vigorosamente el vial durante una semana. Agitar bien el vial ayuda a que las esporas germinen.

Requerido 

• Llama de gas (un encendedor tipo "antorcha" funciona bien).
• Vial de suspensión de esporas comestibles SporeMate o jeringa de esporas; Vial Mondo de Cultivo Liquído (que contenga el micelio); Kit de Clonación Mycomate u otro medio de cultivo adecuado.
• Kit Mycomate para Hongos Comestibles o Esclerosios, u otros medios o sustratos adecuados para el cultivo (si el resultado deseado son hongos).
• Manos limpias y un lugar limpio para trabajar.
  
  

Inyección y colonización del Vial Mondo de Cultivo Líquido en 11 pasos

Descarga aquí: Instructiones Mondo Liquid Culture PDF

1. Si el vial de cultivo líquido se encuentra refrigerado, sáquelo del refrigerador y almacénelo a temperatura ambiente 24 horas antes de usarlo.
2. Lávese bien las manos (el uso de jabón antibacteriano es una opción) y séquese las manos con una toalla limpia o toallas de papel.
3. Retire el vial de cultivo líquido de la bolsa y colóquelo sobre una mesa limpia en un área aseada, libre de residuos.  
4.  Aplique alcohol sobre el puerto de inyección del Vial Mondo de Cultivo Líquido y cualquier otro lugar destinado a ser inyectado (p. ej. vial de esporas o vial de cultivo líquido). Utilice un hisopo con alcohol limpio por cada producto que deba humedecer, con el fin de reducir la contaminación mutua. No exhale directamente sobre los sitios de inyección.
5. Retire la jeringa y la aguja de la bolsa. Retire la cubierta de plástico que protege la aguja (gire en el sentido de las manecillas del reloj y hale). No permita que la aguja entre en contacto con ningún objeto, pues de lo contrario deberá volver a ser esterilizada. En caso de utilizar una jeringa de cualquier otro proveedor, ésta deberá también ser esterilizada.  Las agujas pueden ser esterilizadas con una llama. Es deseable que la aguja quede al rojo vivo, teniendo cuidado de no sobrecalentar y derretir el area donde la aguja está adherida al plástico. Siempre deje enfriar la aguja antes de inyectarla.
6. Si se utiliza un vial de esporas o de cultivo líquido colonizado, agite vigorosamente para mezclar la suspensión. Sostenga el vial en un ángulo, inyecte con la jeringa, y extraiga la cantidad deseada de suspensión.
7. Inyecte varias gotas de suspensión de cultivo (es decir, líquido colonizado del vial de cultivo) o entre varias gotas y 1 ml de suspensión de esporas (dependiendo de la densidad de la solución de esporas) en el Vial Mondo de Cultivo Líquido. Retire la aguja muy lentamente, pues de lo contrario la presión puede ocasionar que un poco del líquido sea rociado afuera, lo cual no representa problema alguno.
8. Limpie el puerto de inyección del Vial Mondo de Cultivo Líquido con un hisopo limpio humedecido en alcohol; deje secar, y almacene verticalmente en una bolsa plástica de cierre hermético.
9. Agite vigorosamente el vial una vez al día durante diez segundos y almacene lejos de la luz solar. Incube las especies de hongos a la temperatura apropiada (generalmente de 23 ºC a 27 ºC). Una temperatura menor retrasa el tiempo de germinación y colonización de las esporas. Sin embargo, una temperatura demasiado alta (por encima de 27 ºC) incrementa el riesgo de contaminación. Nota: los requerimientos de temperatura dependen de la especie.
10. El crecimiento es similar tanto con esporas como con cultivo líquido. Sin embargo, el crecimiento con esporas tarda más que con éste último. Suspensión de esporas: las esporas generalmente tardan entre 24 y 72 horas en germinar, y entre 3 y 7 días deberá ser observable la colonización del medio líquido creciendo en los dos tercios inferiores del vial. Nota: los Viales Mondo de Cultivo Líquido requieren de muy pocas esporas para su crecimiento. Cultivo líquido: El crecimiento se hace evidente durante las 24 horas siguientes a la transferencia del micelio desde un vial colonizado de cultivo líquido a viales de cultivo líquido frescos. Los viales frescos generalmente son colonizados tras varios días (dependiendo de la especie, variedad, y temperatura). La observación es más efectiva cuando se sostiene con cuidado el vial a trasluz, evitando agitar. El sedimento del medio de cultivo puede agitarse si no se es lo suficientemente cuidadoso, haciendo más difícil identificar el crecimiento (esto no representa problema, pues al rato el sedimento se asentará nuevamente en el fondo). Hilos blancos de micelio flotarán hacia la superficie a medida que levanta el vial. Deberá haber una pequeña nubosidad alrededor del micelio, pero el vial completo no debe estar opaco. El área alrededor de la nubosidad del micelio deberá ser razonablemente transparente. Si el vial es levantado lentamente y sin embargo aparece completamente opaco es posible que se encuentre contaminado. Deje reposar el vial sin ninguna perturbación durante varias horas y revise nuevamente para descartar que se trate de sedimento proveniente del fondo lo que oscurecía el vial. Éste puede ser utilizado tan pronto como haya crecimiento saludable o después de una o dos semanas cuando el vial muestre mayor colonización. Nota: cuando entre uno y dos tercios del vial han sido colonizados deberá ser utilizado o almacenado bajo refrigeración para uso posterior (ver a continuación).
11. Cuando la colonización esté completa el vial puede ser usado para inocular otros Viales Mondo de Cultivo Líquido (repitiendo los pasos 1 a 10), Kits MycoMate para Hongos Comestibles o Esclerocios (repitiendo los pasos 1 a 6).
    
    

Contenido del Vial Mondo de Cultivo Líquido

• Vial Mondo de Cultivo Líquido de 10ml o 25ml
• Hisopos con alcohol estériles
• Jeringa estérilizada y  aguja de calibre 18
  
  

Almacenamiento de su Vial Mondo de Cultivo Líquido 

Dado que es un producto sensible, recomendamos colocar el vial Mondo de Cultivo Líquido en el refrigerador durante 24 horas después de recibirlo a una temperatura entre 2 ºC y 8 ºC antes de usarlo. Los viales Mondo de Cultivo Líquido pueden ser utilizados para almacenamiento de cultivos tanto de corta como de larga duración. Una vez que el vial ha sido inoculado, y el micelio coloniza entre el 30% y el 65% del medio líquido, éste puede ser almacenado bajo refrigeración (también entre 2 ºC y 8 ºC) durante varios meses (o más) sin percibir por ello efectos nocivos. Almacene verticalmente en dos o tres bolsas plásticas selladas herméticamente. No se requiere agitar los cultivos durante este período.